河北来复医药科技有限公司
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硝基咪唑类 (Nitroimidazoles) 药物是带有硝基的咪唑化合物，其性状为白色或淡黄色结晶，弱碱性，能和酸结合成盐，遇光易分解，易溶于甲醇，微溶于水，主要用于预防和治疗家禽的滴虫病、猪的出血性下痢及厌氧菌感染，并具有促生长作用，但是该类药物对哺乳动物具有致
癌、致畸、致突变作用和遗传毒性。因此欧盟、北美和我国等都禁止了硝基咪唑在食品动物中的使用。农业部1025号公告-2-2008规定了在畜禽肉中硝基咪唑类药物残留方法检出限为1μg/kg。
(1) 样品提取
称取2.00g(精确到0.01g)均质好的样品，置于50.0mL离心管中，加入15.0mL 乙酸乙酯，涡旋振荡2min，4000rpm离心5min，上清液转移至80mL顶空瓶中，残渣用15.0mL乙酸乙酯重复提取一次，合并两次提取液，加入4g氯化钠和20.0mL正己烷，振荡器上振荡10min，4200rpm离心10min，小心吸取下层乙酸乙酯层于另一离心管中，氮气吹至近干， 用6mL 0.1mol/L盐酸溶液溶解残渣备用。
(2) 净化方法
先将Cleanert PCX (60mg/3mL)小柱分别用2.0mL甲醇、2.0mL 0.1mol/L盐酸水溶液活化平衡，然后样品残液过柱(流速控制在2~3 mL/min)，弃去滤液；再用1.0mL 0.1mol/L盐酸水溶液、1.0mL甲醇和1.0mL甲醇-水(1:9，v/v)淋洗SPE柱，弃去淋洗液，最后用3.0mL甲醇-5%氨水(3:2，v/v)洗脱于锥形试管中，40℃氮气吹干。用1 mL甲醇-水溶液(1:9，v/v)溶解残留物，过0.22μm尼龙针式过滤器后待测。
(3) 检测方法
3.1 色谱条件
色谱柱：Venusil ASB C18，2.1×100mm，5μm，150Å；
流动相：A相-水，B相-乙腈
柱 温：35℃；
进样量：5μL；
表1 液相色谱梯度洗脱条件：
|
时间(min) |
流速 (mL/min) |
A/% |
B/% |
|
0 |
0.35 |
100 |
0 |
|
1.5 |
0.35 |
100 |
0 |
|
3.5 |
0.35 |
60 |
40 |
|
4 |
0.35 |
60 |
40 |
|
4.01 |
0.35 |
5 |
95 |
|
5 |
0.35 |
5 |
95 |
|
5.01 |
0.35 |
100 |
0 |
|
7 |
0.35 |
100 |
0 |
3.2 质谱条件
离子源：电喷雾离子源 扫描方式：正离子扫描
电喷雾电压：5500 V 雾化气压力：55 psi
气帘气压力：13 psi 辅助气压力：60 psi
离子源温度：600℃ 采集方式：多反应监测(MRM)
Q1、Q3均为单位分辨率
质谱参数(见表2)
(4) 实验结果
由表3可知，采用固相萃取结合液相色谱-串联质谱法检测甲硝唑和地美硝唑，加标量为1.0μg/kg加标回收率为90%~100%，能够满足检测要求。由图1可看出经Cleanert PCX固相萃取柱净化，采用Venusil ASB C18色谱柱检测能够使甲硝唑和地美硝唑得到良好的分离，且两种物质峰形良好，保留时间稳定。
表3 硝基咪唑类药物加标回收实验结果(n=3)：
图1 硝基咪唑类样品加标1.0μg/kg液相色谱/串联质谱质量色谱图
结论：
本实验建立了硝基咪唑类残留量检测的LC-MS/MS检测方法，并结合固相萃取技术对禽畜类肉中硝基咪唑类药物的残留量进行了测定。对于加标量为1μg/kg的样品进行了检测，回收率在90%~100%，符合国标要求，固相萃取方法稳定并且色谱柱重现性良好，说明本方法能够用于检测动物源性食品中的硝基咪唑残留量。
(5) 订货信息：
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产品名称 |
规格包装 |
订货号 |
|
Venusil ASB C18 |
5μm,150Å,2.1×100mm |
VS951002-0 |
|
Cleanert® PCX |
60mg/3mL,50/pk |
CX0603 |
|
保护柱套 |
适用于4.6×10mm和2.1×10mm |
SH-100 |
|
直联式保护柱芯 |
5μm,150Å,2.1×10mm |
VS950102-0S |
|
1.5 mL样品瓶 |
短螺纹透明带书写32×11.6mm,100/pk |
1109-0519 |
|
1.5mL样品瓶盖 |
9 mm中心孔蓝盖，红色橡胶/米色PTFE隔垫,45．Shore A 1.0 mm,100/pk |
0915-1819 |
|
针式过滤器(Nylon) |
13mm,0.22μm,200/pk |
AS021320 |
|
一次性注射器 |
2mL两件式 无针头,100/pk |
LZSQ-2ML |
|
乙腈UV级 |
4L/瓶,色谱纯 |
015-4 |
|
甲醇 |
4L/瓶,色谱纯 |
S230-4 |
应用编号：AF10027
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