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前言
维生素B2又叫核黄素，为体内黄酶类辅基的组成部分（黄酶在生物氧化还原中发挥递氢作用），当缺乏时，就影响机体的生物氧化，使代谢发生障碍。其病变多表现为口、眼和外生殖器部位的炎症，如口角炎、唇炎、舌炎、眼结膜炎和阴囊炎等，故本品可用于上述疾病的防治。体内维生素B2的储存是很有限的，因此每天都要由饮食提供。维生素B2是水溶性维生素，容易消化和吸收，被排出的量随体内的需要以及可能随蛋白质的流失程度而有所增减；它不会蓄积在体内，所以时常要以食物或营养补品来补充。广泛存在于酵母、肝、肾、蛋、奶、大豆等中。
实验部分
仪器、试剂与材料
主要仪器设备
高效液相色谱仪-荧光检测器
试剂材料
冰乙酸、甲醇、盐酸均为色谱纯；
氢氧化钠、三水合乙酸钠为分析纯；
维生素B2标准品（纯度98%）；
木瓜蛋白酶：酶活力≥10 U/mg；
高峰淀粉酶：酶活力≥100 U/mg；
1 mol/L氢氧化钠溶液：称取4 g氢氧化钠，加90 mL水溶解，冷却后定容至100 mL；
0.1 mol/L盐酸溶液：移取8.5 mL盐酸，加水稀释至1000 mL，摇匀；
0.05 mol/L乙酸钠溶液：称取6.08 g乙酸钠，加900 mL水溶解，用冰乙酸调节pH为4.0 ~ 5.0之间，加水定容至1000 mL；
0.1 mol/L乙酸钠溶液：称取13.60 g乙酸钠，用水溶解并定容至1000 mL；
混合酶溶液：称取2.345 g木瓜蛋白酶、1.175 g高峰淀粉酶，加水溶解后定容至50 mL。
样品制备
称取2 ~ 10 g混匀后的试样（试样中的维生素B2的含量大于5 µg）于100 mL具塞锥形瓶中，加入60 mL的0.1 mol/L盐酸溶液，充分摇匀，塞好瓶塞。将锥形瓶放入高压灭菌锅内，在121℃下保持30 min，冷却至室温后取出。用1 mol/L氢氧化钠溶液调节pH至6.0 ~ 6.5，加入2 mL混合酶溶液，摇匀后置于37℃培养箱或者恒温水浴锅中过夜酶解。将酶解液转移至100 mL容量瓶中，加水定容至刻度，用滤纸过滤或离心，取滤液或上清液，过0.45 µm水相滤膜作为待测液。
实验条件
液相条件
色谱柱：Venusil®XBP C18(2) 5 µm，4.6 × 150mm，100 Å
流动相：0.05 mol/L乙酸钠溶液︰甲醇 = 65︰35
荧光检测器检测波长：激发波长462 nm，发射波长522 nm
流速：1.0 mL/min；进样量：10 μL。
结果与讨论
实验结果
经图1、图2可知，采用Venusil XBP C18(2)色谱柱检测婴幼儿配方奶粉中的维生素B2，峰形良好，保留时间稳定，能够满足实验要求。
图1 维生素B2标准溶液
图2 婴幼儿配方奶粉中的维生素B2
结论
本实验依据GB 5009.85-2016第一法，用Venusil XBP C18(2)（5 µm，100 Å，4.6 × 150 mm）检测婴幼儿配方奶粉中的维生素B2，并结合液相色谱-荧光检测器对样品进行了检测，结果维生素B2保留时间稳定，峰形良好，而且试样中杂质与维生素B2分离度良好，说明Venusil XBP C18(2)（5 µm，100 Å，4.6 × 150 mm）色谱柱能够用于婴幼儿配方奶粉中维生素B2的检测。
注意事项
可以在避光的条件下，用直接酸解法除去样品中的蛋白质。这种方法操作比较简单，耗时短，成本也比较低。
附：相关产品
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产品名称 |
规格描述 |
包装数量 |
订货号 |
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Venusil XBP C18（2） |
4.6 × 150 mm, 5 µm, 100 Å |
1支 |
VX951505-2 |
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1.5 mL样品瓶 |
短螺纹透明带书写处 32 × 11.6 mm |
100/pk |
1109-0519 |
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1.5mL样品瓶盖 |
9 mm中心孔蓝盖，红色橡胶/米色PTFE隔垫 45°Shore A; 1.0 mm |
100/pk |
0915-1819 |
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微孔滤膜 |
水系，50 mm，0.45 µm |
100片 |
AM015045 |
应用编号：AF10011
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