河北来复医药科技有限公司
联系电话：0311-68058422、88662277
地 址：石家庄市高新区长江街道天山大街51号久福大厦8楼818
类固醇激素又称为甾体激素，是内分泌细胞分泌的高效能生物化学物质。它们在维持生命、调节机体物质代谢、促进性器官发育和维持生育等方面起着重要作用。
类固醇激素在体内的含量较低，对其准确定量具有重要意义。本实验采用Cleanert SLE对血清样品进行净化，建立了血清中类固醇激素的检测方法，可为临床研究提供参考。
目标物信息
表1 目标物结构信息
|
名称 |
CAS |
结构 |
|
可的松 |
53-06-5 |
|
|
黄体酮 |
57-83-0 |
|
|
睾酮 |
58-22-0 |
|
|
勃地酮 |
846-48-0 |
|
材料
Cleanert SLE (200mg/3mL)；Cleanert M96 生物样品前处理仪；Cleanert V96 氮吹浓缩仪；Venusil ASB C18（2.1*50mm，3μm,150 Å）；API 4000+。
样品处理方法
移取200μL血清样品至样品管中，并加入一定体积的甲醇，使溶液中甲醇的含量为5%，摇匀待净化。
将经过预处理的血清样品上样至Cleanert SLE中，可开启负压装置(真空度＜-0.04MPa)将样品抽过上筛板或使用Cleanert M96 生物样品前处理仪将样品压下筛板，待样品全部流至填料中后，静止10min。
在每孔中加入600μL甲基叔丁基醚(MTBE)用于目标物的洗脱，控制洗脱速度为1~2mL/min，在第一次洗脱完成之后，间隔1min再进行第二次洗脱，合并洗脱液。
将合并的洗脱液用96位氮吹仪进行氮吹浓缩，温度设定为40℃，氮吹至近干。
使用200μL乙腈/水（3/7，v/v）将样品进行重溶，摇匀，进样检测。
仪器检测条件
正模式方法（针对黄体酮、睾酮、勃地酮）
HPLC条件
色谱柱：Venusil ASB C18（2.1*50mm，3μm,150 Å）
流速：200μL/min
柱温：30℃
进样量：5μL
流动相：水/乙腈（45/55，v/v）
质谱条件
扫描模式：电喷雾电离正模式
采集模式：多反应监测（MRM）
表2 质谱参数
|
ID |
保留时间/min |
Q1 |
Q3 |
DP |
CE |
|
勃地酮 |
1.66 |
287.3 |
121.3 |
110 |
30 |
|
287.3 |
135.3 |
109 |
24 |
||
|
睾酮 |
1.95 |
289.3 |
97.1 |
114 |
30 |
|
289.3 |
109.2 |
115 |
36 |
||
|
黄体酮 |
4.16 |
315.4 |
97.1 |
95 |
35 |
|
315.4 |
109.1 |
95 |
39 |
负模式方法（针对可的松）
HPLC条件
色谱柱：Venusil ASB C18（2.1*50mm，3μm,150 Å）
流速：200μL/min
柱温：30℃
进样量：5μL
流动相：水/乙腈（70/30，v/v）
质谱条件
扫描模式：电喷雾电离负模式
采集模式：多反应监测（MRM）
表3 质谱参数
|
ID |
保留时间/min |
Q1 |
Q3 |
DP |
CE |
|
可的松
|
2.55 |
405.3 |
359 |
-60 |
-12 |
|
405.3 |
328.8 |
-40 |
-18 |
||
|
405.3 |
300.9 |
-55 |
-26 |
结果
表4 数据结果
|
化合物 |
加标回收率-1 |
加标回收率-2 |
LOD/ng/mL |
|
黄体酮 |
67.90% |
63.48% |
0.15 |
|
睾酮 |
86.94% |
78.57% |
0.04 |
|
勃地酮 |
97.78% |
94.07% |
0.12 |
|
可的松 |
103.53% |
107.69% |
0.02 |
图1 可的松标准溶液色谱图（浓度为5 ng/mL）
图2 勃地酮、睾酮与黄体酮标准溶液色谱图（浓度为5 ng/mL）
图3 血清样品色谱图（负模式）
图4 血清样品色谱图（正模式）
图5 血清加标样色谱图（负模式-加标浓度为5ng/mL）
图6 血清加标样色谱图（正模式-加标浓度为5ng/mL）
订货信息表
|
产品名称 |
规格/包装 |
订货号 |
|
Cleanert SLE |
96深孔板，200mg/3mL |
HC2003-9 |
|
96孔板负压装置 |
与96孔板匹配 |
VM96 |
|
Cleanert M96 生物样品前处理仪 |
与96孔板匹配 |
SPE-M96 |
|
Cleanert V96 氮吹浓缩仪 |
与96孔板匹配 |
NV96-G |
|
96孔接收板 |
2mL/well，与96孔板匹配 |
96SP2036-2 |
|
Venusil ASB C18 |
2.1*50mm，3μm,150 Å |
VS930502-0 |
|
乙腈 |
HPLC, 4*4L |
AH015-4 |
|
水 |
LC-MS级，4*2.5L/箱 |
LC365 |
应用编号：YB10010
上一篇： 激素检测
版权所有© 河北来复医药科技有限公司
技术支持：七星网路
