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不饱和脂肪酸是构成体内脂肪的一种脂肪酸，人体必需的脂肪酸。花生四烯酸(ＡＡ)是一种在生物体内含量较高, 分布最广的多不饱和必需脂肪酸。对粪便样品中花生四烯酸的研究，可为体内脂肪酸代谢提供一定参考信息。
本实验采用Cleanert MAS-M对粪便样品进行净化处理，建立了粪便样品中花生四烯酸含量检测方法。
目标物信息
材料与仪器
Cleanert MAS-M 96孔萃取板；Cleanert M96 生物样品前处理仪；Cleanert V96 氮吹浓缩仪；96孔接收板；PTFE过滤头；Venusil ASB C18（2.1*50mm，3μm，150Å）；API 4000+ LC-MS/MS串联质谱。
样品处理方法
样品前处理
称取50mg粪便样品加入5mL离心管中，向其中加入0.5mL 1%甲酸水，涡旋混匀2min，再向其中加入1.5mL甲醇，涡旋，6000r/min离心5min，取上清液；重复上述步骤再提取一次，合并上清液，过0.22μm PTFE滤头，向其中加入0.6mL氨水，使上样液中含有4%氨水，待净化。
净化过程
所用SPE为Cleanert MAS-M 96孔萃取板
活化：甲醇600μL，水600μL
上样：待净化液全部上样，上样液弃去
淋洗：水600μL，甲醇600μL，弃去
洗脱：3%甲酸乙腈溶液600μL，使用96孔收集板将洗脱液分别收集。
将收集板放置于96位氮吹仪上，将温度设定为45℃，开启氮气将洗脱液氮吹至近干，并用100μL乙腈/水（7/3，v/v）将样品重溶，进样检测。
仪器检测条件
HPLC条件
色谱柱：Venusil ASB C18（2.1*50mm，3μm，150Å）
流速：200μL/min
柱温：30℃
进样量：5μL
流动相：乙腈/水（75/25，v/v）
质谱条件
扫描模式：电喷雾电离负模式
采集模式：多反应监测（MRM）
表1 质谱参数
|
化合物 |
Q1 |
Q3 |
DP |
CE |
|
花生四烯酸 |
303.0 |
259.1 |
-109 |
-18 |
|
303.0 |
230.9 |
-85 |
-29 |
|
|
303.0 |
205.1 |
-107 |
-20 |
|
|
303.0 |
177.1 |
-90 |
-30 |
图1 花生四烯酸标准溶液色谱图（浓度为5ppm）
图2 粪便样品色谱图
图3 粪便样品加标色谱图（加标浓度为10mg/kg）
实验所用的粪便样品中含有约3mg/kg的花生四烯酸，计算加标回收率时需要扣除样品中目标物的含量。
表2 回收率数据
|
加标浓度 |
平均加标回收率 |
LOD |
|
10mg/kg |
88.9% |
1μg/kg |
结论
本实验采用Cleanert MAS-M 96孔板对粪便样品中的花生四烯酸进行批量样品高通量前处理。实验结果表明Cleanert MAS-M能够有效除去干扰物，并能够对花生四烯酸进行定量萃取，回收率达到88.9%，可以满足日常对批量生物样品分析的需求。
订货信息表
|
产品名称 |
规格/包装 |
订货号 |
|
Cleanert MAS-M |
96孔板，50mg/2mL |
MS-M-0502W |
|
PTFE滤头 |
0.22μm，200/pk |
AS041320 |
|
Cleanert V96 氮吹浓缩仪 |
与96孔板匹配 |
NV96-G |
|
Cleanert M96 生物样品前处理仪 |
与96孔板匹配 |
SPE-M96 |
|
96孔接收板 |
2mL/well，与96孔板匹配 |
96SP2036-Y |
|
Venusil ASB C18 |
2.1*50mm，3μm，150Å |
VS930502-0 |
|
乙腈 |
LC-MS级, 4*2.5L/箱 |
LC015 |
|
水 |
LC-MS级，4*2.5L/箱 |
LC365 |
|
甲醇 |
HPLC, 4*4L |
AH230-4 |
|
1.5mL棕色进样样品瓶 |
100/pk |
1109-0520 |
|
进样样品瓶瓶盖 |
100/pk |
0915-1819 |
|
样品瓶内插管 |
100/pk |
0609-0357 |
应用编号：YB10002
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